凱氏定氮儀(蛋白質(zhì)測(cè)定儀),是根據(jù)凱氏定氮法設(shè)計(jì)的自動(dòng)化測(cè)氮蒸餾系統(tǒng),適用于糧油檢測(cè)、飼料分析、植物養(yǎng)分測(cè)試、土肥檢測(cè)、環(huán)保、醫(yī)藥、化工等行業(yè)的分析、教學(xué)及研究中主要用來(lái)檢測(cè)糧食、食品、乳制品、飲料、飼料、土壤、水、藥物、沉淀物和化學(xué)品等中的氨氮、蛋白質(zhì)氮等含量。
凱氏定氮法是測(cè)定化合物或混合物中總氮量的一種方法。在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)銨鹽,然后在堿化蒸餾將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨,隨水蒸氣蒸餾出來(lái)后為過(guò)量的硼酸液吸收,再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)(含氮量*6.25=蛋白含量),并換算成蛋白質(zhì)含量,即可計(jì)算出樣品中的含氮量。此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)測(cè)定方法。凱氏定氮法被定為食品中蛋白質(zhì)含量測(cè)定的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)際通行的測(cè)定方法。
反應(yīng)方程式:
1.有機(jī)物中的胺根在強(qiáng)熱和CuSO4,濃H2SO4 作用下,硝化生成(NH4)2SO4
反應(yīng)式為:2NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4 (其中CuSO4做催化劑)
2.在凱氏定氮器中與堿作用,通過(guò)蒸餾釋放出NH3 ,收集于H3BO3 溶液中
反應(yīng)式為:(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O
3. 用已知濃度的H2SO4(或HCI)標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù)HCI消耗的量計(jì)算出氮的含量,然后乘以相應(yīng)的換算因子,既得蛋白質(zhì)的含量
反應(yīng)式為:(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3
計(jì)算公式:
X:樣品蛋白質(zhì)含量 (g/100g 或g/100mL)
V1、V2:測(cè)定用樣、試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積 (mL)
C:鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的摩爾濃度 (mol/L)
0.014:1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液1mL相當(dāng)于氮的克數(shù)
m:樣品質(zhì)量(g)或體積(mL)
F:蛋白質(zhì)換算系數(shù)6.25
換算系數(shù):
一般食物6.25 乳制品6.38 面粉5.70 高粱為6.24 花生為5.46 米為5.95
大豆及其制品為5.71 肉制品為6.25 大麥小米燕麥 裸麥為5.83
芝麻、向日葵為5.30
實(shí)驗(yàn)裝置:
所需試劑:
1、消化液:硫酸
2、催化劑:硫酸銅、硫酸鉀
3、堿溶液:40%氫氧化鈉
4、吸收液:2%硼酸
5、混合指示劑:1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍(lán)乙醇溶液臨用時(shí)混合。
6、標(biāo)準(zhǔn)滴定液:0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。