使用凱氏定氮法測定蜂王漿粗蛋白

     1．原理
    以濃硫酸消化分解蛋白質(zhì)，其中的氮變成氨，再與硫酸化合生成硫酸銨。生成的硫酸銨與氫氧化鈉反應(yīng)再生成氨，用蒸餾法使氨蒸出，用標(biāo)準(zhǔn)濃度的硫酸溶液與其反應(yīng)，剩余的硫酸再經(jīng)氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，從實際消耗的酸量可推算出生成的氨量。
      2．儀器與試劑
      (1)儀器：分析天平(0.000 lg)、50ml凱氏燒瓶、凱氏定氮半微量蒸餾裝置1套、滴定裝置1套。

(2)試劑：
      濃硫酸（分析純，密度1.84）。
      硫酸銅與硫酸鉀混合試劑：稱取5水硫酸銅1g、硫酸鉀10g，置于研缽中混合均勻，研細(xì)備用。
      混合指示劑：量取0.1%次甲基紅乙醇溶液2份和0.1%溴甲酚綠乙醇溶液3份，臨用時混合。
      2%硼酸溶液：稱取硼酸2g，量取混合指示劑2ml、乙醇20ml，置于錐形瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至100ml，搖勻備用。
      40%氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉40g，加蒸餾水溶解并稀釋至100ml。稀硫酸：量取濃硫酸5.7ml，加蒸餾水稀釋至100ml。
      0.1 mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)定：
      配制：量取濃鹽酸溶液9ml，加蒸餾水稀釋至1000ml，搖勻備用。
      標(biāo)定：準(zhǔn)確稱取在270 -300℃干燥至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉約0.15g，置于150ml錐形瓶中，加蒸餾水50ml使其溶解，滴入混合指示劑10滴，用被標(biāo)定的鹽酸溶液滴定，至溶液由綠色變?yōu)樽霞t色時，煮沸2min，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液由綠色變?yōu)榘底仙珵榻K點。
      使用前，用蒸餾水將0.1 mol/L鹽酸溶液準(zhǔn)確稀釋10倍，配制成0.01 mol/L的鹽酸溶液。

      3．測定方法
      (1)消化：準(zhǔn)確稱取蜂王漿樣品約1g，放入干燥的凱氏燒瓶內(nèi)，加入2g硫酸銅與硫酸鉀混合試劑，再沿瓶壁緩緩加入61ml濃硫酸，在瓶口放一小漏斗，使燒瓶成45°斜放，在通風(fēng)櫥內(nèi)置于電爐上加熱消化（先小火緩緩加熱，使溶液溫度保持在沸點以下，等暴沸停止后，逐步加大火力）。待消化液呈清澈的亮綠色后，再繼續(xù)加熱30min，消化即可完畢（消化時間約為lh），冷卻后備用。
      (2)蒸餾：量取2%硼酸溶液10ml置于100ml的錐形瓶中，加入混合指示劑2滴和少量稀硫酸，將冷凝管尖端浸入液面下。然后，將凱氏燒瓶中的消化液經(jīng)由漏斗移人蒸餾器中，用少量蒸餾水淋洗凱氏燒瓶和玻璃漏斗數(shù)次。向蒸餾器中加入40%氫氧化鈉溶液約25ml之后，再加入5ml蒸餾水（一半流入蒸餾器，一半在玻璃杯中作水封）。用調(diào)溫電爐加熱開始蒸餾。待錐形瓶內(nèi)溶液的顏色由酒紅色變?yōu)樗{(lán)綠色時，繼續(xù)蒸餾10min，將冷凝管尖端提出液面，使蒸汽繼續(xù)沖洗1 min，用少量蒸餾水淋洗尖端，停止蒸餾。
      (3)滴定：用0.01 mol/L的鹽酸溶液滴定錐形瓶中吸收的氨量，滴定至溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛易霞t色為終點，并作空白試驗校正。
      4．計算